Valoración de las pruebas diagnósticas para tuberculosis bovina en un rebaño bovino ubicado en zona de alta incidencia del estado Zulia Venezuela / Valuation of diagnostic tests for bovine tuberculosis in cattle herd located in a high incidence area of Zulia state Venezuela

Las pruebas de tuberculina son las de uso generalizado para el diagnóstico y el control de la tuberculosis (TBC) en el hombre y en los animales. Se caracteriza por una compleja mezcla de antígenos de mycobacterias capaces de inducir reacciones de hipersensibilidad en animales infectados, incluso con mycobacterias diferentes al Mycobacterium bovis, por efectos de reactividad cruzada. La preparación del derivado protéico purificado (PPD), es similar a la de la tuberculina, a diferencia de la concentración de proteínas, las cuales se separan por precipitación con agentes químicos y no por calor, aumentando su especificidad. Los primeros resultados obtenidos con las pruebas serológicas para el diagnóstico de tuberculosis bovina muestran que existe una gran reactividad antigénica cruzada entre las especies de mycobacterias, por lo que se requiere de antígenos más específicos. Se implementó un ELISA-TBC para la detección de anticuerpos anti M. bovis. El ensayo inmunoenzimático para el IFN-y bovino cuando se utilizó conjuntamente con el sistema de cultivo de sangre completa resultó en un ensayo in vitro rápido y sensible para detectar la reactividad de la inmunidad mediada por células al M. bovis en el ganado infectado. A partir de estas pruebas se compararon los resultados obtenidos para establecer la sensibilidad y especificidad utilizando como prueba oro, los datos obtenidos en el cultivo bacteriológico y la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Los animales reaccionantes a la tuberculina incluyeron animales positivos a PPD-B y PPD-A, así como animales negativos a cultivo bacteriológico y PCR. Los PPD-B positivos, no son en su totalidad, los mismos reaccionantes al IFN-y o al ELISA-TBC. Aún cuando su sensibilidad es baja, muestra mayor especificidad y concordancia que el resto de las pruebas utilizadas.

The tuberculin tests are widely used for diagnosis and control of tuberculosis (TB) in humans and animals. It is characterized by a complex mixture of mycobacteria antigens able to induce hypersensitivity reactions even in animals infected with mycobacteria other than M. bovis, for purposes of cross-reactivity. The preparation of purified protein derivative (PPD) is similar to the tuberculin, unlike the concentration of proteins which are separated by precipitation with chemical agents and not by increasing its specific heat. The first results obtained with the serological tests for diagnosis of bovine tuberculosis show that there is a great antigenic cross-reactivity between mycobacterias species so it requires more specific antigens. It implemented a cattle IFN-g test and ELISA-TBC to detect anti M. bovis activity. The immunoassay test for IFN-g used in conjunction with the cropping system of whole blood resulted in an essay in vitro rapid and sensitive to detect the reactivity of the cell-mediated immunity to M. bovis in livestock infected. Comparative test of the tuberculina, test of Gamma Interferon (INF-y) and a test ELISA-TBC, soon was taken to slaughter house to take linfoides weave samples and nodules, to which the test of chain reaction of Polimerasa was applied to them, to bacteriological culture and (PCR), for the identification from the pathogen. From these tests the patterns of immune response settled down and the obtained results of the different tests were compared to establish sensitivity and specificity using with t gold standard, the data collected in culture and PCR. The results were analyzed using the statistical method of analysis of variance for nonparametric tests. The PPD B-positive, are not the same reacting to IFN-y or at ELISA-TBC. Although its sensitivity is low, it shows greater specificity and consistency as the rest of the tests used.

Caracterización de la respuesta inmunitaria de bovinos infectados con Mycobacterium bovis en condiciones de campo en el municipio Colón estado Zulia Venezuela / Characterization of the immune response of bovines with Mycobacterim bovis field infection in an area with high incidence of bovine tuberculosis in Venezuela

La tuberculosis bovina es una enfermedad crónica, zoonótica, infecciosa y contagiosa teniendo como agente causal al Mycobacterium bovis inductor de una respuesta inmunitaria diversa. Esta abarca, desde una respuesta celular capaz de controlar la infección, pasando por una potente, más no eficiente respuesta humoral, hasta un estado de no respuesta o anergia, coadyuvante de la diseminación de la micobacteria. En este estudio se evaluaron animales seleccionados por el Instituto Nacional de Salud Agrícola Integral (INSAI), como reactores a la prueba simple de la Tuberculina en una finca con antecedentes de tuberculosis por más de 20 años. A estos animales se le aplicaron las siguientes pruebas: Comparativa del PPD (PPD-B y PPD-A), prueba de Interferón Gamma (INFy) y un ensayo inmunoenzimático para TBC (ELISA-TBC), seguidamente se realizó la inspección post morten en el frigorífico donde se evaluaron y clasificaron las lesiones macroscópicas compatibles con tuberculosis. Los tejidos seleccionados fueron utilizados para estudios bacteriológicos, extracción de ADN y posterior amplificación secuencia específica con cebadores y oligonucleótidos IS6110 específicos para el complejo M. tuberculosis, aplicando la prueba de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR-SSP) para la identificación definitiva del patógeno. El resultado de estas pruebas permitió observar diferentes patrones de respuesta inmunitaria: celular (PPD+/IFN-y-, PPD+/IFNy+, PPD-/IFNy+), mixto (PPD+ o IFN-y+/ELISA-TBC+) y humoral (ELISA-TBC+). Igualmente se detectaron animales anérgicos, negativos a todas las pruebas inmunológicas, positivos en bacteriología y PCR-SSP. Se pudo establecer la progresión de la enfermedad a partir de la severidad de las lesiones y la edad de los animales. Estos patrones pueden aparecer al inicio de la infección o ser el resultado de la progresión crónica de la enfermedad. Estas diferentes respuestas inmunitarias pueden explicar la permanencia de la infección...

The bovine tuberculosis is a chronic, zoonótic infectious disease and contagious having as causal agent to the Mycobacterium bovis inductive of a diverse immune response. This sandal, from an answer cellular, able to control the infection, happening through powerful, but a nonefficient one, humoral response to a state of not response or anergia, facilitating the dissemination of mycobacteria. In this study animals selected by the Venezuelan National Institute of Integral Agricultural Health (INSAI), like reactors to the simple test of the Tuberculina in a property with antecedents of tuberculosis by but of 20 years. To these animals the following tests were applied: Comparative of the tuberculina (PPD-B and PPD-A), test for Gamma Interferon (INF-y) and a Immun-enzimatic Test for TBC (ELISA-TBC), next was made the inspection post morten in the refrigerator where the compatible macrocospic injuries with tuberculosis were evaluated and classified. The selected weaves were used for bacteriological studies, DNA extraction and later amplification specific sequence with specific boots IS6110 for tuberculoso complex M., applying the test of Chain Reaction of Polimerasa (PCR-SSP) for the definitive identification of the pathogen. The result of these tests allowed to observe different patterns from immune response: cellular (PPD+, PPD+ - INF-y + or INF-y +), mixed (PPD+ and/or INF-y, ELISA-TBC+) and humoral (ELISA-TBC). Also anérgics animals detected themselves, negatives to all the immunological tests, positive in bacteriology and PCR-SSP. It was possible to be established the progression of the disease from the severity of the injuries and the age of the animals. These different immune responses may explain the persistence of infection in farm notwithstanding the implementation of the resolution of official control and eradication of Bovine Tuberculosis in the region.